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简述荧光抗体检测基本原理
更新时间:2023-06-09      阅读:999
  某些荧光物质在一定条件下,羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒既能与抗原或抗体结合,又不影响抗原与抗体的特异性结合,用荧光抗原或荧光抗体对待检标本染色后,在荧光显微镜下观察,可看到发出荧光的抗原抗体复合物。作为蛋白质标记用的荧光物质需具备如下条件:
  ①有与蛋白质分子形成稳定共价键的化学基团,但不形成有害产物;
  ②荧光效率高,与蛋白质结合的需要量少;
  ③结合物在一般条件下稳定,结合后又不影响免疫活性;
  ④作为组织学标记,结合物的荧光必须与组织的自发荧光有良好的反衬;
  ⑤结合程序简单,能制成直接应用的商品。满足这些要求的荧光物质有硫氰酸荧光素(FITC)、四乙基罗丹明(RB20)和四异甲基罗丹明(TMRITC)等,其中应用较广的是异硫氰酸荧光素。荧光抗体(抗原)染色法有以下几类:
  1.羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒直接法 直接滴加2~4个单位的标记抗体于标本区,置试盒中.于37℃染色30min,然后置大量pH7.O~7.2的磷酸缓冲液(PBS)中漂洗15min,干燥.封载即可镜检。
  2.双层法标本先滴加朱标记的抗血清.置湿盒内。37℃30min。漂洗后,再用标记的抗抗体染色37℃30min,漂洗、干燥、封载。
  3.夹层法本法主要用于检测组织中的Ig。标本先用相应的可溶性抗原处理,漂洗后再用与该检Ig有共同特异性标记抗体染色。
  4.抗补体染色法用荧光标记抗补体抗体,即可用以示踪能进行补体结合的任何抗原抗体系统。将已灭活的抗血清与1:10稀释血清混合.滴加于标本上,37℃30~60min,漂洗后,羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒再用抗补体染色37℃30min,漂洗、干燥、封载、镜检。

 

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