2.简：即用型，步骤简单，用时少，一步离心，淋巴细胞轻松get；

3.晰：分离条带清晰，“白膜层"明显，手残党使用也能so easy；

4.高：分离的淋巴细胞活力好，利于后续实验使用；

5.纯：分离的淋巴细胞纯度大于90%，红细胞、粒细胞等杂细胞少，没有分散的细胞团块，减少杂质干扰，使检测结果更准确；

6.广：可以用来分离人的淋巴细胞和单核细胞，外周血、骨髓、脐带血等多种血液样本全覆盖；

老师，Ficoll分离人外周血单个核细胞的原理是什么啊？

外周血单个核细胞 (Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞、单核细胞和树突状细胞，其中淋巴细胞占70%-80%，单核细胞占10-30%，树突状细胞占1-2%。 

Ficoll根据血细胞的密度差异，通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。单个核细胞的体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为1.092左右，淋巴细胞和单个核细胞比重为1.075左右。

原来是这样，那用Ficoll进行人外周血中淋巴细胞分离时，各层分布的细胞我也不太明白，可以讲解一下嘛？

很简单，记住下面这张图就可以了，在利用Ficoll作密度梯度离心时，各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集：血浆和血小板密度较低，悬浮于分离液的上部；红细胞与粒细胞密度较大，沉于分离液的底部；PBMC 密度稍低于分离液，位于分离液界面之上。因此从管底往上依次为：红细胞-Ficoll细胞分离液-淋巴细胞-血浆。一般要先小心地将上层的血浆和血小板移除后再吸取淋巴细胞。

这么看就清晰多啦，可是我的离心结果中出现了血小板污染，这是为什么呢？

很多情况都可以导致血小板污染，可以从以下几个方面对实验操作进行优化：

1.血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2 h以内）；

2.离心温度控制在18～20℃；

3.取目的层样品时，需先将上层溶液去掉，再吸取目的层；

4.分离后进行洗涤时，可以在较低的离心力情况下进行离心处理，血小板密度比较低，会留在血浆中，PBMC在沉淀里，通过这一操作可以除掉一部分血小板；

5.吸取过多的血浆层也可能会导致淋巴细胞中血浆蛋白及血小板污染。

我明白了，那红细胞污染又是什么原因呢？

出现红细胞污染的原因比较简单，可能是由于以下几个问题：

1.温度太低。低温使Ficoll密度变大，从而导致红细胞粒细胞在最底层聚集效果不佳，进入上边的PBMC层；

2.离心速度太慢、离心时间太短，各层分布的细胞没有得到沉淀，应该根据结果摸索更适宜的离心条件。

老师你在分离人外周血单个核细胞的时候还有什么经验，快把秘诀分享给我！

那我可得好好和你聊聊了！

1.分离结果为何出现淋巴细胞产量低、活力低且出现其它类型细胞污染的情况？

可能是由于温度过高，使Ficoll密度变小，PBMC进入分离液层，回收的PBMC数量减少。也可能是由于血液样本放置过长，或是血液样本保存和运输途中条件不当等原因。

2.分离结果为何出现淋巴细胞产量低但活力正常的情况？

在分离时，未用全血及组织稀释液或者PBS将血液稀释到1:1，通常情况下，红细胞比容较高，高细胞密度会导致大量的淋巴细胞陷入聚集的红细胞团块中，此时应进一步稀释血液样品，提高单核细胞产量并减小红细胞团块的体积。

3.分离结果为何出现淋巴细胞低产量且粒细胞污染增加的情况？

可能是由于离心机转子振动，导致淋巴细胞带的增宽，与下层细胞混合。应先检查转子是否已平衡，再选择合适的转速，以避免自发共振频率。

谢谢老师，秘诀我都记好啦，那你有没有什么产品推荐呢？

当然啦，Bioss全新推出的人外周血淋巴细胞分离液，是一种无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液，能够有效分离人外周血淋巴细胞，并且保证分离的淋巴细胞活率，无菌条件下所分离的细胞可用于免疫学检测。 有了它你的细胞分离一定可以事半功倍！