Western及IP细胞裂解液

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Western及IP细胞裂解液

产品简介

WIP组织细胞裂解液（Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation ），是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本产品裂解细胞获得的裂解产物，可用于PAGE，蛋白印迹（Western Blot），免疫沉淀（immnolprecipitation，IP）,免疫共沉淀（co-IP） 和蛋白与多肽的分离纯化。

WIP裂解液的主要成分为Tris（pH 7.5，20mM），150mM NaCl，去垢剂Triton X-100以及多种蛋白酶抑制剂,无需自备PMSF、磷酸酶抑制剂等蛋白酶抑制剂。WIP不仅可以用于细胞培养物的裂解，也可直接用于大多数动物组织的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时，可强烈地抑制蛋白、多肽的降解，并保持原有的分子结构和蛋白间相互作用。

用WIP裂解得到的组织细胞蛋白样品，可以用博奥森生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford试剂盒测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

包装清单

WIP组织细胞裂解液        30ml

PMSF（100X）             0.3ml

保存条件：

-20°C保存，一年有效。

注意事项：

1．为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。

2．PMSF应现用现加。

3．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4°C进行。

4．蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健结构咨询。

二.使用方法说明

1．培养细胞

取出WIP裂解液，待融化后，颠倒混匀数次，适量分装冻存。在使用前取出，按比例加入PMSF（使其最终浓度为1mM），混匀，立即使用。

贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍（如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗）。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入WIP。用枪吹打数下，使WIP和细胞充分接触。通常WIP接触细胞数秒后细胞就会被裂解。

悬浮细胞，收集培养细胞，离心去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍（如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗），用手指把细胞用力弹散，按6孔板每孔细胞加入100-200微升的比例加入WIP。如果细胞数量较大，应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加WIP。用手指轻弹管底以促进WIP和细胞充分接触，裂解*时应无明显的细胞颗粒。

裂解物经10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

2．组织样品

取Ep管，分别称重标记，把组织切成小块装入Ep管中，称重。按每20毫克组织加100-200微升的比例加入WIP（如裂解不*，可以适当增加WIP的用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当减少WIP的用量）。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

如果组织样品本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入WIP裂解，通过振荡（Vortex）以使样品裂解*