凝胶回收试剂盒（含柱）

保存条件 室温干燥可保存一年，4℃保存可更长时间。

使用时如发现结晶，可于 37~55˚C水浴加热助溶。离心吸附柱不建议低温或大于 30˚C 保存，否则可能影响吸附效率。

凝胶回收试剂盒（含柱）

产品简介

胶回收试剂盒利用硅基质材料在高盐缓冲系统对 DNA 高效、专一吸附的原理，配备聚合美自主研发的膜结合液（又称溶胶液）和高性能的硅胶膜离心吸附柱，可在 15 分钟内清除凝胶、核酸染料及其他杂质，高效回收 DNA 片段。本试剂盒配套的膜结合液和离心吸附柱的最大吸附量为 20µg，对 100-10000 bp 线性双链 DNA 片段的回收效率可高达 50-90%，也可用于单链 DNA 片段和质粒 DNA 的纯化。因回收率受 DNA 片段大小、浓度等因素的综合影响，故应尽量加大电泳的 DNA 片段浓度，以提高回收率。回收后的 DNA 片段可以直接用于酶切、连接、测序、标记、杂交和体外转录等多种分子生物学实验。

回收效率

50 bp 回收效率：30-50%

100-200 bp 回收效率：50-70%

200-5000 bp 回收效率：70-90%

5 kb-10 kb 回收效率：50-70%

产品组份

膜结合液（MB）：25ml （50T）

膜漂洗液（MW）：15ml （50T） 初次使用前请按瓶标说明加入无水乙醇混匀

洗脱缓冲液（EB）：10ml （50T）

平衡液（BL）：25ml （50T） 请使用当天平衡液处理过的吸附柱

离心吸附柱及收集管：50（50T） 室温密闭干燥保存

实验准备

用户需自行准备的材料：含 DNA 样品的琼脂糖凝胶，无水乙醇，异丙醇， 55ºC 水浴，切胶设备，台式离心机。

初次使用本试剂盒，请按瓶标说明向膜漂洗液（MW）中加入相应体积的无水乙醇（用户自备），并在试剂瓶上做标记。

操作步骤

1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 μl 的平衡液 BL，12,000 rpm （-13,400×g ） 离心 1 min，弃收集管中滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子，这一步很重要，试剂盒放置时间长不用，处理一下效果如新，减少浪费。如果新开封马上用，可以不做柱平衡）

2. 切胶：用干净刀片将目的 DNA 条带切下，尽量切除不含 DNA 的凝胶。注意：紫外线对 DNA 片段有损坏作用，切胶要迅速，避免长时间照射，同时做好眼睛及皮肤的防护。

3. 称重：将切下的含有目的 DNA 条带的凝胶切成小块，放入已称重的 1.5 ml 塑料离心管中，再称重（总重-空重=净重）。

4. 溶胶：加入等体积膜结合液（MB），60℃水浴，每隔 2-3 min 上下振荡，直到凝胶*溶解。注意：如凝胶重量为 100 mg，其体积可视为 100 ul，则加入 100 ul 膜结合液；如凝胶浓度大于 2%，所用膜结合液体积加倍；对于  回收

<300 bp 的小片段或者大于 3000bp 的大片段，可在凝胶*溶解后再加入 1/2 胶块体积的异丙醇以提高回收率；胶块*溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。

5. 吸附：待溶液冷却后加入离心吸附柱中，室温静置 2 min，让 DNA 片段与吸附柱中的硅胶膜充分结合，然后 12,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中滤液。注意：如总体积超过 750 ul 可分 2 次将溶液加入同一离心吸附柱中；为增加目的 DNA 片段的洗脱浓度，也可将多管溶胶液加入到同一离心吸附柱中。

6. 清洗：加入 600 ul 的膜漂洗液（MW），12,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中废液。注意：膜漂洗液（MW）按要求加入乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发; 如后续实验要求纯度较高，可再清洗一次。

7. 干燥：将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min，甩干残留漂洗液。注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续实验。

8. 洗脱：将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管中，在吸附柱中央加入 30-50 ul 洗脱缓冲液（EB），室温放置 2 min。12,000 rpm 离心 1 min 收集 DNA 片段。注意：为增加回收效率，可将洗脱液在 60℃预热，也可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置 2 min，再次离心收集。如需使  用去离子水洗脱，可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0-8.5 之间）。