荧光抗体在使用前应加以鉴定，鉴定指标记包括效价及荧光素与蛋白质的结合比率，抗体效价可以用琼脂双扩散法进行滴定，效价大于1:16者较为理想，荧光素与蛋白质结合比率（F/P）的测定和计算的基本方法是：将制备的荧光抗体稀释至A2801≈1.0，分别测读A280（蛋白质特异吸收峰）和标记荧光素的特异吸收峰，按公式计算。

　　F/P值越高，说明抗体分子上结合的荧光素越多，反之则越少，一般用于固定标本的荧光抗体以F/P＝1.5为宜，用于活细胞染色的以F/P＝2.4为宜。

　　荧光抗体工作浓度的确定方法类似ELISA间接法中酶标抗体的滴定，将荧光抗体自1:4～1:256倍比稀释，对切片标本作荧光抗体染色。以能清晰显示特异荧光、且非特异染色弱的最高稀释度为荧光抗体工作浓度。

　　荧光抗体的保存应注意防止抗体失活和防止荧光猝灭，最好小量分装，－20℃冻存，这样就可放置3～4年。在4℃中一般也可存放1～2年。

　　荧光抗体规律：

　　（1）初次反应产生抗体：当抗原次进入机体时，需经一定的潜伏期才能产生抗体，且抗体产生的量也不多，在体内维持的时间也较短。

　　（2）再次反应产生抗体：当相同抗原第二次进入机体后，开始时，由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合，可使原有抗体量略为降低。随后，抗体效价迅速大量增加，可比初次反应产生的多几倍到几十倍，在体内留存的时间亦较长。

　　（3）回忆反应产生抗体：由抗原刺激机体产生的抗体，经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原，可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同，则称为特异性回忆反应；若与初次反应不同，则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的，短时间内即很快下降。